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實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：柯薩奇病毒A10型PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99267
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
白介素15(IL15)elisa試劑盒英文名稱：IL15 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框103抗體規(guī)格：100g

白介素13受體α2(IL13Rα2)elisa試劑盒英文名稱：IL13Rα2 ELISA Kit兒茶酚O基移位酶抗體規(guī)格：25g

白介素13(IL13)elisa試劑盒英文名稱：IL13 ELISA Kit補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體規(guī)格：5g

白介素12B(IL12B)elisa試劑盒英文名稱：IL12B ELISA Kit平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體規(guī)格：1g

白介素12A(IL12A)elisa試劑盒英文名稱：IL12A ELISA Kit心肌病相關(guān)蛋白2規(guī)格：5g

白介素11受體α(IL11Rα)elisa試劑盒英文名稱：IL11Rα ELISA Kit5號染色體開放閱讀框34抗體規(guī)格：100g

白介素11(IL11)elisa試劑盒英文名稱：IL11 ELISA KitE1A激活基因激蛋白1抗體規(guī)格：25g

白介素10(IL10)elisa試劑盒英文名稱：IL10 ELISA Kit2號染色體開放閱讀框42抗體規(guī)格：5g

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)elisa試劑盒英文名稱：OCT4 ELISA Kit豬瘟病抗體規(guī)格：1g

氨酰tRNA合成酶復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)elisa試劑盒英文名稱：AIMP1 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框54抗體規(guī)格：5g

氨基己糖苷酶Bβ(HEXβ)elisa試劑盒英文名稱：HEXβ ELISA Kit2號染色體開放閱讀框43抗體規(guī)格：5g

氨基己糖苷酶Aα(HEXα)elisa試劑盒英文名稱：HEXα ELISA Kit豬瘟病抗體規(guī)格：5g

氨基端前心鈉肽(NT-ProANP)elisa試劑盒英文名稱：NT-ProANP ELISA Kit中心體蛋白110抗體規(guī)格：1g

氨基端前腦鈉素(NT-ProBNP)elisa試劑盒英文名稱：NT-ProBNP ELISA Kit纖維素酶規(guī)格：5g

阿黑皮素原(POMC)elisa試劑盒英文名稱：POMC ELISA Kit分裂周期蛋白14B抗體規(guī)格：10ml
柯薩奇病毒A10型PCR檢測試劑盒PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK4蛋白抗體L-型電壓依賴鈣離子通道α1F亞基(CACNα1F)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) cAMP

PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體N-型電壓依賴鈣離子通道α1B亞基(CACNα1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) cAMP

PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK8蛋白抗體R-型電壓依賴鈣離子通道α1E亞基(CACNα1E)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Cytidine 5'-monophosphate

磷酸化蛋白激酶9抗體T-型電壓依賴鈣離子通道α1H亞基(CACNα1H)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 5-Formylsalicylic acid

過氧化還原酶5/6抗體端粒重復(fù)結(jié)合因子2(TERF2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) D-Ribose 5-phosphate disodium salt hydrate

過氧化還原酶1抗體過氧化還原酶6(PRDX6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Hematoxylin

苯乙甲基轉(zhuǎn)移酶抗體鈉/離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶α1肽(ATP1α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Adenosine 5‘-monophosphate sodium salt

前列腺素F2a/PGF2 α抗體鈉/離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶β1肽(ATP1β1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) CTP.Na2