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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

?小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過(guò)心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動(dòng)脈壁的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細(xì)胞膜電位的復(fù)極化、超極化，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、炎癥及凋亡等。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，對(duì)研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機(jī)制具有非常重要的作用。冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human caneous lymphocyte associated aigen (CLA) ELISA Kit 人皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(CLA)ELISA試劑盒

Humangasin-reliasingpeptide,GRPELISAKit 人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human6-hydroxydopamine,6-OHDAELISA試劑盒人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

正苯基萘胺攝入法細(xì)菌膜損傷熒光檢測(cè)試劑盒20次

MouseAi-nuclearAibody,ANAELISAKit小鼠抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠抗中性?？贵welisa試劑盒   小鼠抗中性粒抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗中性?？贵w試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗中性?？贵w試劑盒、小鼠抗中性?？贵welisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體elisa試劑盒   小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒、小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抗血小板抗體elisa試劑盒   小鼠抗血小板抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗血小板抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗血小板抗體試劑盒、小鼠抗血小板抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抗心0脂抗體elisa試劑盒   小鼠抗心0脂抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗心0脂抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗心0脂抗體試劑盒、小鼠抗心0脂抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠細(xì)胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)ELISA試劑盒 ，英文名： CSE ELISA Kit

Mouse retinol binding protein (RBP) ELISA Kit 小鼠結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒

MouseFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISAKit 小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHSP-27(Humanheatshockprotein27)ELISAKit人熱休克蛋白27規(guī)格：48T/96

細(xì)胞MEK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-15大鼠白介素15規(guī)格：48T/96

FETUB重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

APC(Activated protein C 0.5mgAPC(Activated protein C) APC活化蛋白C抗原

FGFBP3重組人 FGFBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CST1 Protein Human 重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞APC(Activated protein C 0.5mgAPC(Activated protein C) APC活化蛋白C抗原

CST1 Protein Human 重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FETUB重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FGFBP3重組人 FGFBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。