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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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更新時(shí)間：2023-10-26 20:34:42瀏覽次數(shù)：678
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Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*103 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*101. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
GAD 人脫羧酶 規(guī)格： 48T/96T
GDH 人脫氫酶 規(guī)格： 48T/96T
OFQ/N 人孤腓肽 規(guī)格： 48T/96T
Lebtospira 人鉤端螺旋體IgM 規(guī)格： 48T/96T
Lebtospira 人鉤端螺旋體IgG 規(guī)格： 48T/96T
HGV-IgM 人庚型肝炎病毒IgM 規(guī)格： 48T/96T
HGV-IgG 人庚型肝炎病毒IgG 規(guī)格： 48T/96T
T 人睪酮 規(guī)格： 48T/96T
HVA 人高香草酸 規(guī)格： 48T/96T
MHB 人高鐵血紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
u-T4 人高敏甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T
HDL-C 人高密度脂蛋白 規(guī)格： 48T/96T
HDL 人高密度脂蛋白 規(guī)格： 48T/96T
GP-73 人高爾基蛋白73 規(guī)格： 48T/96T
HGF 人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
HB-EGF 人肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
HCⅡ 人肝素輔因子Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
MR 人甘露糖受體 規(guī)格： 48T/96T
MBLR 人甘露糖凝集素受體 規(guī)格： 48T/96T
MBP/MBL 人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素 規(guī)格： 48T/96T
Mannose 人甘露糖 規(guī)格： 48T/96T
CG 人甘膽酸 規(guī)格： 48T/96T
SCFR 人干細(xì)胞因子受體 規(guī)格： 48T/96T
SCF/MGF 人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
IP-10/CXCL10 人干擾素誘導(dǎo)蛋白10 規(guī)格： 48T/96T
IRF 人干擾素調(diào)節(jié)因子 規(guī)格： 48T/96T
CNR-1 人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1 規(guī)格： 48T/96T
CRT 人鈣網(wǎng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
calnexin 人鈣聯(lián)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
VGCC 人鈣離子通道抗體 規(guī)格： 48T/96T
CR 人鈣結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CAM 人鈣調(diào)素 規(guī)格： 48T/96T
CaN 人鈣調(diào)磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
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CALD 人鈣調(diào)結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
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histatin 5 人富組蛋白 規(guī)格： 48T/96T
PNP 人副腫瘤性天皰瘡抗體 規(guī)格： 48T/96T
RPA-70 人復(fù)制蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
CPSA 人復(fù)合前列腺特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T
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SLPI 人分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制因子 規(guī)格： 48T/96T
SIgA 人分泌型免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
