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上海博湖生物科技有限公司
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更新時間：2023-10-26 20:38:42瀏覽次數(shù)：1108
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AH109 感受態(tài)細胞100ul*10 操作方法（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
AH109 感受態(tài)細胞100ul*102 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
AH109 感受態(tài)細胞100ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項
1. 感受態(tài)細胞應保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
MGP 人基質(zhì)γ羧基蛋白 規(guī)格： 48T/96T
lumican 人基膜聚糖 規(guī)格： 48T/96T
MSTN 人肌抑素 規(guī)格： 48T/96T
dystrophin 人肌養(yǎng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYOG 人肌細胞生成素 規(guī)格： 48T/96T
CK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 規(guī)格： 48T/96T
CK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 規(guī)格： 48T/96T
CK 人肌酸激酶 規(guī)格： 48T/96T
MHC 人肌球蛋白重鏈 規(guī)格： 48T/96T
MLCK 人肌球蛋白輕鏈激酶 規(guī)格： 48T/96T
MLC 人肌球蛋白輕鏈 規(guī)格： 48T/96T
Myosin 人肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T
TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Tn-Ⅰ 人肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
FⅫa 人活化Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T
APCR 人活化蛋白C抵抗素 規(guī)格： 48T/96T
APC 人活化蛋白C 規(guī)格： 48T/96T
LHRH 人黃體生成素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T
cAMP 人 規(guī)格： 48T/96T
cGMP 人環(huán)磷酸鳥苷 規(guī)格： 48T/96T
COX-2 人環(huán)加氧酶2 規(guī)格： 48T/96T
CsA 人A 規(guī)格： 48T/96T
talin 人踝蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ALOX-5 人花生四烯酸5脂加氧酶 規(guī)格： 48T/96T
AA 人花生四烯酸 規(guī)格： 48T/96T
EPOR 人紅細胞生成素受體 規(guī)格： 48T/96T
EPO 人紅細胞生成素 規(guī)格： 48T/96T
EMP 人紅細胞膜蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ESF 人紅細胞刺激因子 規(guī)格： 48T/96T
sm Actinin-α 人橫紋肌輔肌動蛋白α 規(guī)格： 48T/96T
MLZE 人黑素瘤衍生拉鏈額外核因子 規(guī)格： 48T/96T
MC Ab 人黑色素細胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
MSH 人黑色素細胞刺激素 規(guī)格： 48T/96T
MMSAM 人黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子 規(guī)格： 48T/96T
AH109 感受態(tài)細胞100ul*10MAGE 人黑色素瘤相關(guān)抗原 規(guī)格： 48T/96T
MAGE 人黑色素瘤相關(guān)抗原 規(guī)格： 48T/96T
MART/Melan-A 人黑色素瘤標記物 規(guī)格： 48T/96T
NF-κB p65 人核因子-κB亞基p65親和肽 規(guī)格： 48T/96T
