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上海博湖生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒

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Equi-phi29 DNA Polymerase
Equi-phi29 DNA Polymerase
參考價(jià)1170-6240
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1000U1170元15 盒 可售
10KU6240元15 盒 可售

更新時(shí)間:2023-11-09 17:45:41瀏覽次數(shù):577

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【簡單介紹】
貨號 P-PR1290
Equi-phi29 DNA Polymerase是 phi29 的改造體,并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了 phi29 DNA 聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性(>70kb)的基礎(chǔ)上,提高了滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)溫度,該酶酶可以在 42 度條件下持續(xù)的進(jìn)行 DNA 合成(而 phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低)。

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

商品屬性

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

P-PR1290

Equi-phi29 DNA Polymerase

1000U

P-PR1290

Equi-phi29 DNA Polymerase

10KU

產(chǎn)品介紹:

Equi-phi29 DNA Polymerase 是 phi29 的改造體,并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了 phi29 DNA 聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性(>70kb)的基礎(chǔ)上,提高了滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)溫度,該酶酶可以在 42 度條件下持續(xù)的進(jìn)行 DNA 合成(而 phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低)。

這種高溫的反應(yīng)特性,在以下幾個(gè)方面對實(shí)驗(yàn)有明顯的提升:

(1)在 NGS 測序中,其提升了高 GC 含量、回文結(jié)構(gòu)等復(fù)雜模板的延伸能力,使得 NGS 的覆蓋度更均一,降低測序所需深度;

(2)高溫的反應(yīng)條件,提升了基因組 DNA的 WGA 產(chǎn)物的合成量,并可以進(jìn)行變溫?cái)U(kuò)增;

(3)降低測序中 Gap 區(qū)域,提升單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和完整度;

(4)降低非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物;

(5)提升 MDA/RCA 等實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增性能和特異性。
除此外,該酶仍然具有很強(qiáng)的 3’→5’外切酶校讀功能,合成的 DNA 片段保真性高。該酶的外切酶活性較強(qiáng),因此合成過程中引物需要 3’端硫代修飾,以降低外切活性對引物的切割效應(yīng)。
image.png

儲(chǔ)存:-20℃可保存 3 年。
image.png注意:在不同的實(shí)驗(yàn)類型中,Oligo根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行選擇。
2. 引物和模板退火:體系配制完畢后,放置到 PCR 儀中,95℃ 3min,25℃ 3min。3. 退火完畢后,向退火產(chǎn)物中加入 1μl Equi-phi29 DNAPolymerase,混合均勻。
4. 擴(kuò)增反應(yīng)
4.1 恒溫?cái)U(kuò)增
對于環(huán)狀DNA模板采用恒溫反應(yīng)作為推薦使用30℃恒溫?cái)U(kuò)增,30℃孵育 6~16h.該酶在 30-42℃條件下均可工作,
必要時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型進(jìn)行調(diào)整。
4.2 變溫?cái)U(kuò)增
對于基因組 DNA 或 cDNA 模板,推薦使用變溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),以在短時(shí)間內(nèi)獲得更高產(chǎn)量,并提高了低濃度模板的擴(kuò)增產(chǎn)量。在 PCR 儀上做如下設(shè)置:
【30℃ 5min;42℃ 15s】循環(huán) 72 次(約 6h)或 120次(約 10h).必要時(shí),反應(yīng)結(jié)束后,可于 65°C 10min 進(jìn)行失活反應(yīng)。
使用注意事項(xiàng)
(1)必要時(shí)可單獨(dú)額外添加終濃度 1 mM DTT 和 0.2mg/ml BSA,可提高反應(yīng)效率。
(2)該酶的反應(yīng)溫度為 42 ℃ (在 30~42℃之間均有活性)。
(3)65℃ 10min 即可使該酶失活。
(4)根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型需要,調(diào)整dNTP的濃度100~500 μM。
(5)添加 Yeast Pyrophosphatase可提高 DNA 產(chǎn)量。
(6)反應(yīng)引物 3’端的硫代修飾可避免引物降解。

5.jpg

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