| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價(jià) | ￥1660-￥3050 |
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型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1660元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 3050元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-27 11:30:44瀏覽次數(shù)：233
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4-香豆酸fu酶A連接酶(4CL)試劑盒,微板法
4-香豆酸fu酶A連接酶(4CL)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 4-香豆酸：輔酶 A 連接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL) 試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS3001W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 4-香豆酸：*酶 A 連接酶（4CL ，EC 6.2.1.12）是木質(zhì)素生物合成的關(guān)鍵酶之一，位于 苯丙酸途徑與木質(zhì)素特異合成途徑的轉(zhuǎn)折點(diǎn)上，主要催化肉桂酸生成相應(yīng)的肉桂酸*酶 A 酯。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程 中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量而提高其品質(zhì)提供依據(jù)。 4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下測(cè) 4-香豆酸 CoA 生成速率， 即可反映 4CL 活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 120mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 14mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再加 2.5mL 蒸餾水，于 80-100℃水浴 1-2 分鐘溶解備用。 試劑三 粉劑×1 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再加 2.1mL 蒸餾水充分溶解備用。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板（UV 板）、低溫臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、4-香豆酸：輔酶 A 連接酶（ 4CL)活性測(cè)定： 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取 液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 4℃×12000rpm 離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照數(shù)量（104）：提取液體積(mL)為 500-1000：1 的比例進(jìn)行提取 ③ 液體樣本：若是澄清液體，直接檢測(cè)，若液體樣本渾濁，需 4℃×12000rpm，離心 10min，取上清液檢測(cè)。 2、 上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 333nm。 2 所有試劑至常溫（25℃）狀態(tài)。 3 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 樣本 20 試劑一 140 試劑二 20本試劑盒僅供科研使用 2 試劑三 20 混勻，室溫（25℃）下立即于 333nm 處讀取吸 光值 A1，30min 后再讀取 A2，△A=A2-A1。 【注】1. 若△A 在零附近徘徊，可加大樣本量（如增至 40μL，則試劑一相應(yīng)減少），或延長(zhǎng) 反應(yīng)時(shí)間 T，則改變后的 V1 和 T 需代入公式重新計(jì)算。 2. 若上升趨勢(shì)不穩(wěn)定，可每隔 2min 讀取一次吸光值，選取一段線性上升時(shí)間段來(lái)參與 計(jì)算，相對(duì)應(yīng)的 A 值也代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘使吸光值變化 0.01 所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。 4CL(U/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.01÷T=166.7×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算： 酶活定義：每克組織每分鐘使吸光值變化 0.01 所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。 4CL(U/g 鮮重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.01÷T=166.7×ΔA÷W 3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 酶活定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘使吸光值變化 0.01 所需的酶量定義為一個(gè)酶活單位。 4CL(U/104 cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.01÷T=0.333×ΔA 4、按液體體積計(jì)算： 酶活定義：每毫升液體每分鐘使吸光值變化 0.01 所需的酶量定義為一個(gè)酶活單位。 4CL(U/mL)=ΔA÷V1÷0.01÷T=166.7×ΔA V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02 mL； T---反應(yīng)時(shí)間，30min； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。 Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。
