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上海宇淳生物科技有限公司

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土壤過氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法
土壤過氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法
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更新時間:2024-06-05 16:37:50瀏覽次數(shù):261

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【簡單介紹】
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土壤過氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法
土壤過氧化氫酶主要分解土壤中的過氧化氫,降低土壤中過度累積的過氧化氫對植物根 系的危害。

土壤過氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法

土壤過氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤過氧化氫酶(Solid-Catalase,S-CAT)試劑盒說明書 (貨號:WS3030W 微板法 96 ) 一、產(chǎn)品簡介: 土壤過氧化氫酶主要分解土壤中的過氧化氫,降低土壤中過度累積的過氧化氫對植物根 系的危害。本試劑盒提供一種簡單,靈敏,快速的測定方法,即 CAT 催化過氧化氫產(chǎn)生水 與氧氣,剩余的過氧化氫與一種高靈敏顯色探針反應生成有色物質,其在 510nm 左右有最 大吸收峰。通過過氧化氫的減少量來計算土壤中 CAT 酶的活力。 本試劑盒突出特點是從紫外波長(240nm:過氧化氫的檢測波長)轉換到可見波長 510nm)檢測,無需使用石英比色皿或 UV 板。而且由于過氧化氫極其不穩(wěn)定,直接檢 測造成讀值不穩(wěn)定,且蛋白質等組分在此紫外波長下也有光吸收,影響結果精確性。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 液體×1 4℃保存 用前甩幾下或者離心使試劑落入底 部,分別取出 40μL 六個新的 EP 中,再加 2mL 蒸餾水充分溶解備用。 試劑二 液體 22mL×1 室溫 試劑三 液體 35mL×1 4℃保存 試劑四 液體 7mL×1 4℃保存 標準品 液體 1.5mL×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、蒸餾水。 四、土壤過氧化氫酶(Solid-Catalase,S-CAT)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干,先粗研磨,過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】:土壤風干,可減少土壤中水分對于實驗的干擾;;土壤過篩,保證取樣的均勻細膩; 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 510nm。 ② 試劑一事先按照試劑配制要求配制好,再進行以下操作。 [建議]若一次性樣本較多,離心數(shù)量有限,可分批操作,待一批樣本加完試劑二開始離心時,再 進行下一批操作(土壤樣本可一次性稱完,分批按照加樣表操作)。 ③ 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(µL測定管 無基質管 無土管 (僅做一次) 土樣(g0.1 0.1 蒸餾水 800 800 800 室溫(25℃)震蕩(如:搖床)培養(yǎng) 30min試劑一 100 100 蒸餾水 100本試劑盒僅供科研使用 2 ④ 顯(粉)色反應:在 96 孔板中依次加入: 【注】:1. 無土管的顏色最深,若測定管顏色很淺接近無色,說明樣本里面過氧化氫酶含量很高,則震蕩 10min 的時間縮短(如 5min)或減少土壤取樣質量 W。則改變后的 T W 重新代入公式計算。 2. 若一次性檢測樣本較多,在顯色反應階段可酌情分批操作和讀值,為保證數(shù)據(jù)的精確性,顯色 反應階段半個小時內完成。 五、結果計算: 1、標準曲線:y = 0.1027x - 0.0318;x 為標準品摩爾質量(µmol),y A。 2、單位定義:每小時每克土樣催化 1µmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 S-CAT(µmol/h/g 土樣)=[(A+0.0318)÷0.1027]÷W÷T=58.4×(A+0.0318)÷W T---反應時間,10min=1/6h; W---土壤樣本實際取樣量。 附:標準曲線制作過程: 1 把標準品(100µmol/mL)稀釋成六個濃度梯度的標準品:0, 20, 40, 60, 80, 100. µmol/mL。也可根據(jù)實際樣本來調整標準品濃度。 2 按照無土管加樣順序(100µL 試劑一換成 100µL 標準品,其他不變)依次加入試劑 測定,標準品的摩爾質量作為橫坐標,吸光值作為縱坐標,即得標準曲線。 混勻,室溫(25℃10min務必每隔 2min 搖晃一次)。 試劑二 100 100 100 12000rpm,4℃或室溫離心 10min,上清液務必全部轉移至新的 EP 中,待測。 上清液 5 5 5 試劑三 165 165 165 試劑四 30 30 30 室溫(25℃)靜置 5min,務必立即510nm 下讀取吸光值 AA=A 無土管-A 測定管-A 無基質管)。




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