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上海宇淳生物科技有限公司

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土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法
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【簡單介紹】
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土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法
土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,簡稱 PPO)是一類以銅、錳為活性中心的氧化還原 酶,主要來源于土壤微生物

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土壤多酚氧化酶(S-PPO)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書 (貨號:WS1130W 微板法 96 ) 一、產品簡介: 土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,簡稱 PPO)是一類以銅、錳為活性中心的氧化還原 酶,主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放的酶,能把土壤中芳 香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質、氨基酸、糖類、礦物等物質反應生成大小分子 量不等有機質和色素,完成土壤芳香族化合物循環(huán),也可用于土壤環(huán)境修復。 土壤多酚氧化酶能夠催化底物*旋多巴產生紅色的醌類物質,依據文獻選擇該有色產物 475nm 做為特征光吸收波長,通過測定進而計算得出土壤多酚氧化酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 110mL×2 4℃保存 試劑二 粉體 mg×3 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部,每瓶 加入 30mL 試劑一,超聲溶解,溶解 后的試劑三天內用完。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋/恒溫振蕩培養(yǎng)箱、可調式移液器。 四、土壤多酚氧化酶(S-PPO的測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: 取新鮮土樣或風干土壤,先粗研磨,過 40 目篩網,待測備用。 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 475nm。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 土樣(g0.1 0.1 試劑一 200 1000 試劑二 800 振蕩混勻,25℃水?。ㄩg隔 10min 振蕩混勻幾下)或恒溫振蕩培養(yǎng) 箱振蕩孵育 1 h 孵育結束后立即于 4℃(需低溫)12000rpm 離心 5min,取 200μL 上清液于 96 孔板中,于 475nm 處讀取吸光值 A,A=A 測定管-A 對照管(每個樣本需做一個自身對照)。 【注】:1. A 測定大于 1.8,可用蒸餾水對離心后待檢測的上清液進行稀釋,則稀釋倍數(shù) D 需代入公 式重新計算。 2. A 值小于 0.01,可延長 25的孵育時間 T(如由 1h 可增加至 4h),則改變后的 T 需代入 公式重新計算。 五、結果計算: 1、單位定義:每小時每克土壤中產生 1nmol 紅色產物定義為一個酶活力單位。本試劑盒僅供科研使用 2 S-PPO 活力(nmol/h/g 土樣)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=540.5×A÷W×D ε---紅色產物摩爾吸光系數(shù),3.7×103 L/mol/cm; T---反應時間,1h; V1---反應總體積,1000μL=1mL=1×10-3 L; d---光徑,0.5cm; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; W---土壤樣本實際取樣量,g。



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