| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥1070 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 1070元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-06-07 09:33:23瀏覽次數(shù)：211
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土壤熒光素二乙酸酯FDA水解酶試劑盒微板法
土壤熒光素二乙酸酯FDA水解酶試劑盒微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤熒光素二乙酸酯（Fluorescein diacetate，FDA）水解酶試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS2230W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶與土壤總碳、全氮、全磷等土壤養(yǎng)分指標(biāo)間關(guān)系密切，與微生物活 性間的相關(guān)性比其他酶活性更顯著，同時(shí)也能夠很好地反映系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化和土壤中微生物的活 性，是土壤健康質(zhì)量的微生物學(xué)指標(biāo)之一。 FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物—熒 光素，該黃色產(chǎn)物在 490nm 處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化即可得出 FDA 水解酶活性。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 110mL×2 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加 6mL 丙酮充分溶解備用 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、丙酮。 四、FDA 水解酶(FDA)活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，先粗研磨過 40 目篩備用。 【注】土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 490nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 1000 1000 試劑二 50 丙酮 50 混勻，37℃反應(yīng) 1h 丙酮 150 150 混勻，12000 rpm 離心 10min，取 200μL 至 96 孔板中， 于 490nm 下讀取吸光值 A，ΔA＝A 測定-A 對照。 【注】：若ΔA 的差值較大，超過 1.5，可以降低土壤取樣量，或者反應(yīng)產(chǎn)物用蒸餾水稀釋之 后再檢測，則稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0878x + 0.0094：x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(μg)，y 為ΔA。本試劑盒僅供科研使用 2、活性定義：每小時(shí)每克土樣中產(chǎn)生 1μg 熒光素定義為一個(gè)酶活力單位。 FDA 活性(μg/h/g)=(ΔA -0.0094)÷0.0878÷W÷T×D=11.39×(ΔA -0.0094)÷W×D T---反應(yīng)時(shí)間，1h； W---土壤樣本實(shí)際取樣量； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； 熒光素分子量---332.31。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（5μmol/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1 mL 丙酮溶解，再加 1 mL 水（母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液用試劑一稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.4,0.8 , 1.2, 1.6, 2. μmol/mL。也 可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照 20μL 標(biāo)準(zhǔn)品+1mL 試劑一+180μL 丙酮的體系來操作，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn) 曲線。 2
