| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥900 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 900元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-06-13 16:44:17瀏覽次數(shù)：221
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山li醇氧化酶（SOX)測定試劑盒,微板法
山li醇氧化酶（SOX)測定試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 山*醇氧化酶（SOX）測定試劑盒說明書 （貨號：WS2750W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 山*醇作為一種運輸糖，被卸載到果實中時轉(zhuǎn)化成其他糖類物質(zhì)，山*醇氧化酶 （sorbitol oxidase，SOX）就是山*醇轉(zhuǎn)化和利用過程中的關(guān)鍵酶之一，該酶與果實的 品質(zhì)以及果實中糖類物質(zhì)的積累密切相關(guān)。 山*醇氧化酶（SOX）催化山*醇生成葡萄糖，葡萄糖進一步與 3,5－二硝基水楊酸 反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，經(jīng)光譜掃描在 540nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與山*醇氧化酶（SOX）活性成正比。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解 備用；用不完的試劑 4℃保存; 試劑三 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、山*醇氧化酶（SOX）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱樣本 0.1g（水分充足的樣本可取 0.5g）于研缽中，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿后 轉(zhuǎn)入離心管中。12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 2、上機檢測： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm。 2 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 20 20 試劑一 60 80 試劑二 20 混勻，30℃（水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱）下孵育 30min 試劑三 100 100 混勻，沸水?。?/span>95-100℃）（可用封口膜纏緊 EP 管）5min， 流水冷卻 蒸餾水 200 200 混勻，取出 200μL 至 96 孔板中，于 540nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本自身需做一個自身對照）。 【注】：1.若吸光值大于 1.8，可減少樣本加樣量 V1（如減至 10μL，則試劑一相應(yīng)增加），則改 變后的加樣體積 V1 需代入計算公式重新計算。本試劑盒僅供科研使用 2 2.若ΔA 值在零附近徘徊，可延長 30℃水浴時間（如增至 60min），則改變后的反應(yīng)時間 T 需代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y = 0.0125x - 0.0338；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（μg），y 為ΔA。 2、按蛋白濃度計算： 單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活性單位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/mg prot）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(V1×Cpr ) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338) ÷Cpr 3、按鮮重計算： 單位的定義：37℃每克組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活性單位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/g 鮮重）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(W×V1÷V) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338)÷W V----加入提取液體積，1mL； V1----加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL； T----反應(yīng)時間，30min； W----樣本鮮重，g； Cpr----樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（5mg/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水（母液需在兩天 內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根據(jù)實際樣本來 調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照測定管的加樣順序依次加樣操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
