| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價(jià) | ￥1850 |
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型號(hào)
-
品牌
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廠(chǎng)商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
| 96T | 1850元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-06-17 11:15:39瀏覽次數(shù)：222
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植物果糖1,6二磷酸(酯)酶(FBP)試劑盒微板法
植物果糖1,6二磷酸(酯)酶(FBP)試劑盒微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 植物果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP) 試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS5060W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 果糖-1,6 二磷酸酶又稱(chēng)果糖 1,6 二磷酸酯酶（FBP，EC 3.1.3.11），有兩種 FBPase 存在于 光合細(xì)胞中。胞質(zhì)型 FBP 主要存在于細(xì)胞質(zhì)，參與蔗糖合成和糖異生途徑；葉綠體型 FBP 存在于葉綠體中，它在二氧化碳同化途徑中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。 FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無(wú)機(jī)磷，接著與酶促?gòu)?fù)合物相互作用， 伴隨著 NADPH 的生成，通過(guò)檢測(cè) NADPH 在 340nm 處的增加速率，進(jìn)而計(jì)算出 FBP 酶活 性大小。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 提取液一 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 提取液二 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使試劑落入底 部，再加 1.1mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 粉劑 mg×1 支 -20℃保存 用前甩幾下或離心使試劑落入底 部，再加 1.1mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使試劑落入底 部，再加 2.1mL 蒸餾水溶解備用。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽和蒸餾水。 四、果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(FBP)活性檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 總FBP酶提取：建議稱(chēng)取約0.1g樣本，加入1mL提取液二進(jìn)行冰浴勻漿，于4℃，13000rpm 離心5min，取上清液測(cè)定。 ② 胞漿和葉綠體 FBP 酶的分離： 稱(chēng)取約0.2g樣本，加入1mL提取液一，快速冰浴勻漿后于4℃，1600rpm離心5min，棄 沉淀，取上清再4℃，5000rpm離心15min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL 提取液二，強(qiáng)力渦旋震蕩15s，置于冰上(或冰箱)孵育15min，在4℃，13000rpm離心5min， 取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。提示：整個(gè)葉綠體的提取過(guò)程須保持4℃低溫環(huán)境。 建議測(cè)定總 FBP 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的 FBP，則按照步驟②提取粗酶液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，設(shè)置溫度 25℃。 ② 試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管本試劑盒僅供科研使用 2 樣本 10 試劑一 10 試劑二 10 試劑三 150 輕輕混勻，室溫（25℃）孵育 5min 試劑四 20 混勻，于 340nm 處測(cè)定，10s 時(shí)讀取 A1，10min 后讀取 A2，ΔA=A2-A1。 【注】若ΔA 在零附近徘徊，可以延長(zhǎng)至 20min 后重新讀取 A2，或則增加樣本量 V1（如增 至 20μL，則試劑三相應(yīng)減少），則改變后的反應(yīng)時(shí)間 T 或樣本量 V1 需重新代入計(jì) 算公司計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活性單位。 FBP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T =643.1×ΔA÷Cpr 2、按照樣本鮮重計(jì)算： 酶活定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。 FBP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109] ÷(W×V1÷V)÷T =643.1×ΔA÷W V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； d---96 孔板光徑，0.5cm； ε---NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm； W---樣本質(zhì)量，g； T---反應(yīng)時(shí)間，10min； Cpr---蛋白濃度（mg/mL），建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測(cè)定試劑盒。
