客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

產(chǎn)品特點(diǎn):
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

具體計(jì)算如下：
RNA溶于40 ?l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495?l的TE中，測(cè)得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來(lái)測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 ?l，剩余RNA總量為：35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測(cè)
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。
2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS，pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。
②準(zhǔn)備RNA樣品
取3?gRNA，加3倍體積的甲醛上樣染液，加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預(yù)電泳5min，隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h，電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃（其大小決定于用于抽提RNA的物種類型），上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖體RNA）組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì)，可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過(guò)程中如果出現(xiàn)DNA污染，將會(huì)在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn)，即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶，RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。
樣品cDNA合成:
①反應(yīng)體系
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1  逆轉(zhuǎn)錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘，取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl，37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘，得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液，保存于-80℃待用。

Rhesus antibody Rh PCDHB4  原鈣粘蛋白β4抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB3  原鈣粘蛋白β3抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB2  原鈣粘蛋白β2抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB16  原鈣粘蛋白16抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB15/PCDHB22  原鈣粘蛋白15抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB13  原鈣粘蛋白13抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB12  原鈣粘蛋白β12抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHB11  原鈣粘蛋白β11抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHAC2  原鈣粘蛋白介導(dǎo)的PCDHαC2受體抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHAC1  原鈣粘蛋白1抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHA9  原鈣粘附蛋白α9抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHA8  原鈣粘附蛋白α8抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHA7  原鈣粘附蛋白α7抗體 規(guī)格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PCDHA5  原鈣粘附蛋白α5抗體 規(guī)格  0.2ml

 VC  植物  規(guī)格： 48T/96T
 VB6  植物6  規(guī)格： 48T/96T
 VB12  植物12  規(guī)格： 48T/96T
 VA  植物  規(guī)格： 48T/96T
 PG  植物磷脂酰甘油  規(guī)格： 48T/96T
 PA  植物磷脂酸  規(guī)格： 48T/96T
 ABA  植物激素脫落酸  規(guī)格： 48T/96T
 CAM  植物鈣調(diào)素  規(guī)格： 48T/96T
  OH  植物25羥基3  規(guī)格： 48T/96T
 PV  魚(yú)卵黃高磷蛋白  規(guī)格： 48T/96T
 MHC  魚(yú)類主要組織相容性復(fù)合體  規(guī)格： 48T/96T
 T3  魚(yú)類三碘甲狀腺原氨酸  規(guī)格： 48T/96T
 Cortisol  魚(yú)類  規(guī)格： 48T/96T
 T4  魚(yú)類甲狀腺素  規(guī)格： 48T/96T
 GnRH  魚(yú)類釋放激素  規(guī)格： 48T/96T
 hs-CRP  魚(yú)類超敏C反應(yīng)蛋白  規(guī)格： 48T/96T
 IL-1β  魚(yú)類白介素1β   規(guī)格： 48T/96T
 IL-1α  魚(yú)類白介素1α  規(guī)格： 48T/96T
 OT/BGP  魚(yú)骨鈣素/骨蛋白  規(guī)格： 48T/96T
 GHRH  羊促生長(zhǎng)激素釋放激素  規(guī)格： 48T/96T
 CA  鴨子碳酸酐酶  規(guī)格： 48T/96T
 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒MHC  鴨主要組織相容性復(fù)合體  規(guī)格： 48T/96T
 IgE  鴨免疫球蛋白E  規(guī)格： 48T/96T
 aPT1/aPT2  鴨抗凝血素抗體  規(guī)格： 48T/96T
 DEV  鴨病毒性腸炎病毒  規(guī)格： 48T/96T
 IL-4  鴨白介素4  規(guī)格： 48T/96T
 IL-2  鴨白介素2  規(guī)格： 48T/96T
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。