熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

產(chǎn)品名稱：腦膜蠕蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Parelaphostrongylus tenius
貨號：XG01P3940
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

CCL-149(大鼠肺泡上細胞)5×106cells/瓶×2

人喉表細胞英文名稱：Hep-2

SW620(人結(jié)腸細胞)5×106cells/瓶×2

水平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基/Water Plate Count Agar飼料中細菌總數(shù)測定250克國產(chǎn)/進口

CLED培養(yǎng)基/溴百里酚藍糖瓊脂/CLED Medium/BROLACIN Agar/Bromothymol-blue Lactose Cystine Agar/Cystine-Lactose-Electrolyte Deficient Agar尿液中微生物的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

人肝內(nèi)膽管上細胞*培養(yǎng)基100mL

SW 1353(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2

GoldCassette-HIS/HIS重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(精裝)2次2次、10次

人臍動脈內(nèi)細胞

肺鱗英文名稱：NCI-H520

小鼠骨肉瘤英文名稱：LM-8

水解清蛋白/水解蛋白/清蛋白水解液/Lactalbumin hydrolysateBR250/1000克國產(chǎn)/進口

BLB培養(yǎng)基/BLB Medium雙歧桿菌的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
腦膜蠕蟲探針法熒光定量PCR試劑盒人髓鞘性蛋白(MBP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒10127256001

小鼠食管上皮細胞*培養(yǎng)00mL 97303化學(xué)試YY肽2(PYY2)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

馬兜鈴B;Aristolochic a 訂購|咨詢  20mg 酐酶2體 MSH ELISA Kit 黑色細胞刺激(MSH)ELISA試盒

人端粒酶(TE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒100g

9050366化學(xué)試蛋白聚糖3(PRG3)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

二芐  英文名稱：Magnesium valproate   保存：20℃   50mg 化p21激活激酶1/2/3體

人組織因子途徑抑制因子(TFPI)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒BR生物試劑級

604353化學(xué)試二酯酶7B(PDE7B)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

麝香 訂購|咨詢  GC≥98%；0.15ml/vial FAM161A蛋白體 PLEK2 ELISA Kit 普列克底物蛋白2(PLEK2)ELISA試盒