產(chǎn)品名稱：奧爾森派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Perkinsus olseni
貨號：XG01P3962
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標準品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

Hanks’ Balanced Salt Solution規(guī)格：500ml

人海馬神經(jīng)元

黃芪甲苷規(guī)格：100mg/支；98%

UACC-812(人腺導管瘤細胞)5×106cells/瓶×2

NCTC 1469(小鼠正常肝細胞)5×106cells/瓶×2gersion

Hepa 1-6, 小鼠肝細胞

AllIP/Co-IP Kit(Rabbit/Human/Rat/Mouse)通用型免疫沉淀試劑盒(兔/人/大鼠/小鼠)50次50次

白假絲酵母 Candida albicansHBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞)

A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)COS/猴腎細胞株

百脈根根瘤菌 Rhizobium lotiMDA-MB-231（ATCC來源）, 人腺細胞

串珠鐮孢 Fusarium moniliforme純白鏈霉菌 Streptomyces candidus

倉鼠腎成纖維細胞宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

蠟蚧輪枝菌 Verticillum lecanii好食脈孢菌
奧爾森派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒人載脂蛋白F(ApoF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒g(shù)

TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 NCIH1755 [H1755](人肺癌細胞)

蓮心;Liensinine  20mg 訂購|咨詢 心浸液瓊脂/心浸液瓊脂/BHI瓊脂/BHI Agar用于培養(yǎng)各種細250克國產(chǎn)/進口

人載脂蛋白H(ApoH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  50mg

CMM039小鼠胃粘膜上皮細胞*培養(yǎng)100mL

原花青B1 訂購|咨詢  HPLC≥95%;5mg 胚胎干細胞RAS蛋白體 NPTXR ELISA Kit 神經(jīng)正五聚蛋白受體(NPTXR)ELISA試盒

人載脂蛋白M(ApoM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 0g

TACSTD2 Others Mouse 小鼠 OP2 / TACSTD2 人細胞裂解液 (陽性對照)

7表10去酰紫杉 訂購|咨詢  20mg 人ADP/ATP轉(zhuǎn)位酶2 ELISA試盒人96T785000 pg/mL大鼠皮質(zhì)結(jié)合球蛋白(CBG)ELISA試盒，CBG ELISA Kit

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。