產(chǎn)品名稱：肉孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Sarcocystis spp.
貨號：XG01P4068
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces chromogenes白黃側(cè)耳 Pleurotus cornucopiae

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeSH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

NCI-H716(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)植物桿菌 Lactobacillus plantarum

胎兒皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基EJ(人膀胱細(xì)胞)

根瘤菌QSG-7701(人正常肝細(xì)胞)

宇佐美曲霉 Aspergillus usamii I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)

根瘤菌 Rhizobium sp.香菇 Lentinula edodes

Ca Ski, 人宮頸細(xì)胞串珠菌 Leuconostoc lactis

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum光帽鱗傘 Pholiota nameko

人食管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基S-180(小鼠肉瘤細(xì)胞)

NCI-H23(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeCNE-2Z(人鼻咽細(xì)胞)

根瘤菌哈茨木霉
肉孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Thymosin β10*96T

大鼠胰島細(xì)胞*培養(yǎng)基phosphodiesterase 5現(xiàn)貨供應(yīng)96T

大鼠胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody*96T

大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基PEA上海直銷96T

大鼠頜下腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基β-hexosaminidase*96T

大鼠腮腺細(xì)胞*培養(yǎng)基Serotonin N-acetyltransferase現(xiàn)貨供應(yīng)96T

大鼠腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Leukocyte esterase*96T

大鼠胰腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Sialidase上海直銷96T

大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基DNA methyltransferase*96T

大鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基enterovirus-71現(xiàn)貨供應(yīng)96T

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。