傅經(jīng)理
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ATP染色
一、染色步驟
1、工作液配制：?Tris堿5g+氯化鈣0.499g+蒸餾水定容至250ml，室溫保存。?取?染液中合
適的量，用鹽酸調(diào)PH至10.4。?取?染液中合適的量，每10ml的量加15mg的ATP鈉鹽，充
分溶解，調(diào)PH至9.4。
2、工作液孵育：未經(jīng)固定的新鮮組織冰凍切片自然晾干，PH10.4的工作液孵育5min，傾去孵育液，PH9.4的工作液孵育30min。
3、CaCL2染色：傾去孵育液，CaCL2溶液處理3次，每次2min。
4、硝酸鈷染色：硝酸鈷作用5min，流水沖洗5min。
5、硫化銨染色：1%硫化銨溶液處理30s，流水沖洗5min。
6、脫水封片：切片依次入無(wú)水乙醇I 5min -無(wú)水乙醇II 5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性樹(shù)膠封片。
7、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
二、結(jié)果判讀：
Ⅰ型呈淺灰色或無(wú)色，Ⅱ型呈深灰或黑色，分型清楚。
ATP染色三、注意事項(xiàng)：
1、切片一定要是新鮮組織的冰凍切片，不可以固定。
2、Tris堿、氯化鈣粉劑常溫保存，硫化銨常溫避光保存，ATP鈉鹽-20℃保存，其它染液4℃
保存，使用前先復(fù)常溫。
3、工作液和1%硫化銨溶液要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能保存。
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