傅經理
樹脂包埋(透射電鏡)
價格:220元
樹脂包埋實驗步驟:
1、取材:電鏡取材非常嚴格,取材過程中速度要快,5分鐘內要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大??;取材部位要準確、取材溫度要低zuihao是在4℃條件下進行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細胞不可用酶消化下來,先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細胞,離心,細胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。
2、固定:取材后要及時固定,組織、細胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液,植物等標本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時左右后,放入4℃保存運輸(如果是植物或者肺組織,則需要進行真空抽氣固定,一般需要抽氣固定24小時左右,直至標本*沉入容器底部)。
3、鋨酸后固定:將標本從固定液中取出,用0.1mol/L的PB清洗并過夜,第二天轉入1%鋨酸后固定,固定時間普通標本2h左右,植物標本8至12h左右。
4、脫水:鋨酸固定后的標本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水,濃度依次是50%、70%、80%、90%、95%、,植物標本則會在50%乙醇前面再增加一個30%乙醇梯度,脫水時間普通標本為10~15min,植物標本脫水時間為1~1.5h4、浸透:用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑,從純丙酮開始,中間經過丙酮和樹脂的混合劑,混合比例丙酮從高到低到純樹脂,整個浸透過程需要1~2天完成。
5、包埋:先將組織對應的標簽放包埋板中,然后加入樹脂,再將浸透好的樣本放入包埋板中,調整好包埋面,然后放入恒溫箱內熟化,熟化過程需要2~3天。熟化完成后,樣本樹脂包埋完成。
樹脂包埋(透射電鏡)
注意事項:
標本編號盡量簡潔
1、 動物組織樣本:1-3min內取樣,取樣組織米粒大小,盡量薄,部位jingzhun,如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。
2、 植物組織樣本 :取材要求同動物組織樣本,盡量取較嫩的部位。組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內
3、 細胞樣本:貼壁細胞:培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基不經漂洗迅速加電鏡固定液用細胞刮輕輕刮下細胞收集到離心管內(對細胞形態(tài)無要求的可以用酶消化細胞),離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大?。?000轉,5min),棄固定液后加新的電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存
4、 懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存
細菌樣本:長于固體培養(yǎng)基的細菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細菌放于電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存
5、 懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄
培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存
6、 有磁性的樣本不接