目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>基因檢測PCR試劑盒>>熒光定量PCR>> 50次駱駝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:駱駝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
產(chǎn)品貨號:BK-P96849
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點:
1. 使用化學修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量:
內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
75-78-5二甲基二錄硅烷;二甲基二錄化硅Dimetxyldichlorosilane HumanchemerinELISA試劑盒人chemerinELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
依普利酮醇酸鉀鹽 質(zhì)量規(guī)格:美國進口Eplerenone Hydroxyacid Potassium Salt 人網(wǎng)膜素(omein)ELISA檢測試劑盒HumanomeinELISAKit 96T/48T 人體hTE表達實時定量檢測試劑盒20
4-氧度酸質(zhì)量規(guī)格:美國進口4-Oxo Etodolac 大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)試劑盒 Rat fibroblast growth factor 4,FGF4 ELISA Kit ELISAKitCCP人抗環(huán)胍氨酸肽抗體規(guī)格:48T/96T
N-甲基度酸質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Methyl Etodolac 英文名稱RatFLT3ELISAKIT大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(FLT3)規(guī)格:96T/48T 大鼠游離(F-TESTO)ELISA試劑盒 ,英文名: F-TESTO ELISA Kit
依維莫司-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口Everolimus-d4 抗體/蛋白HRP標記制備試劑盒5 人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA檢測試劑盒Humanypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 96T/48T
四螨嗪(標準品)Clofentezine質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98.6% 犬γ氨基(GABA)試劑盒 Canine Gamma-aminobyric acid,GABA ELISA Kit 人橋粒芯糖蛋白-1(Dsg-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
四螨嗪標準溶液(100μg/ml,u=4%)Clofentezine solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4% 英文名稱HumanSomatostatinELISAKit人生長抑素(SS)規(guī)格:96T/48T 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)試劑盒 Mouse von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit
四螨嗪標準溶液(10μg/ml,u=6%)Clofentezine solution質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6% 大巖筒(gloxinia)增殖培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 (OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
萎銹靈(標準品)Carboxine質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.9% RatlymphocytefactorELISA試劑盒大鼠細胞因子ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumaeceptorⅡfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅡELISA試劑盒人球蛋白GFc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
駱駝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人腎臟上皮細胞HREpiC4-羥基心得安β-D-葡萄糖苷酸 質(zhì)量規(guī)格:美國進口4-Hydroxy Propranolol β-D-Glucuronide
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) S(-)-鹽酸心得安質(zhì)量規(guī)格:美國進口S(-)-Propranolol • HCl
IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞雷洛昔芬-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口Raloxifene-d4
CM-H115人腦動脈血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL