Amplite 比色法鋅離子定量 試劑盒 鋅是一種必需的微量元素，在許多生物過程中起著重要作用。它是許多酶，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和遺傳表達(dá)控制所必需的必需因子。鋅的狀態(tài)也會影響細(xì)胞分裂，生長，分化，發(fā)育和衰老的基本過程。缺鋅的臨床癥狀包括皮質(zhì)炎，免疫力低下，腹瀉，愈合不良，發(fā)育遲緩，性腺機(jī)能減退，胎兒生長障礙和畸形。在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中非常需要簡單，直接和自動化的鋅離子測量程序。 AAT Bioquest的Amplite 比色鋅定量試劑盒使用我們專有的Zn-620 提供了一種檢測生物樣品中鋅濃度的穩(wěn)定方法，其中鋅與探針結(jié)合，增強(qiáng)吸收在620 nm附近。在無鋅溶液中，吸光度為480nm，而當(dāng)鋅離子與探針結(jié)合時，其在620nm處顯示出大的增加（> 100倍）。鋅的濃度可以用比色法測定，吸光度比為A610nm / A480nm。該檢測方法可用于血清，血漿和尿液等生物樣品，檢測靈敏度為1μM。 AAT Bioquest的Amplite 比色法鋅離子定量 試劑盒（＃19000）更加靈敏，可用于檢測低至0.1μM的Zn離子。

Zn²⁺檢測樣品分析方案

概述

測試樣品（50μL）或Zn²⁺

添加鋅探針試劑50μL

在室溫下孵育5-10分鐘讀取A610nm / A480nm的吸光度比

操作步驟

1.ZnCl₂標(biāo)準(zhǔn)品和試樣制劑：

1.1將10μL的100mM ZnCl₂標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）加入990L測定緩沖液（組分B）中，得到1mM ZnCl₂標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2將10μL的1mM鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）加入到990L測定緩沖液（組分B）中，得到100μMZnCl₂標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3取300μL的100μMZnCl2標(biāo)準(zhǔn)溶液（來自步驟1.2）進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，得到50,25,12.5,6.25,3.13,1.56和0μM連續(xù)稀釋的ZnCl2標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4用測定緩沖液（組分B）將測試樣品稀釋至5-100μM范圍。加入50μLZnCl2標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋樣品并對照到每個孔中，如說明書中的表1和2所示。

2.運(yùn)行鋅測定：

2.1將25μLZn-620（組分A）加入5 mL測定緩沖液（組分B）中以制備Zn測定混合物。 向ZnCl₂標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μLZn測定混合物（參見說明書中步驟1.5，表1和2）以使總ZnCl₂測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μL測定反應(yīng)混合物。

2.2在室溫下孵育反應(yīng)5-10分鐘，避光。

2.3用吸光度讀板儀在610 nm和480 nm處檢測吸光度的增加。