樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備堿性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
3.在室溫或37°C孵育30至120分鐘
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 620/660 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 630 nm）

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 SunRed 底物儲(chǔ)備液（250X）：
將100μL雙無(wú)菌H2O加入到SunRed 底物（組分A）的小瓶中，制備250X SunRed 底物儲(chǔ)備溶液。 應(yīng)立即使用原液。

1.2堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 U / mL）：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸餾水至堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分C，10單位），以產(chǎn)生100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。 注意：堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)
將10μL100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取1,000 mU / mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（AS7-AS1）和H2O-0.1％BSA。

3.工作溶液

對(duì)于一個(gè)96孔板，將20μL250XSunRed 底物儲(chǔ)備溶液加入到5 mL分析緩沖液（組分B）中并充分混合以制備堿性磷酸酶工作溶液。 注意：避免光照并為每個(gè)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備新鮮的反應(yīng)混合物。