樣品實驗方案

簡要概述

1. 加入相同體積的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 監(jiān)測Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）的熒光強度（底部讀取模式）

溶液配制

儲備溶液配制

CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液：

將20 µL DMSO（組分B）添加到CytoCalcein™Violet 450，AM（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液。注意：20 µL CytoCalcein™Violet 450，AM儲備液足以裝滿一塊板。避光。為了存放，請將管子緊緊密封。

工作溶液配制

將CytoCalcein™Violet 450，AM儲備溶液的全部內(nèi)容物（20 µL）加入10 mL的測定緩沖液（組分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。該CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時。注意：如果諸如CHO細胞之類的細胞含有能促進熒光染料隨時間滲漏的有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，則應(yīng)制備丙*舒儲備溶液并以孔內(nèi)工作濃度范圍為1至1的濃度添加到上樣緩沖液中。 2.5毫米 分裝并保存未使用的丙*舒儲備溶液于≤-20°C。

操作步驟

1. 根據(jù)需要用測試化合物處理細胞。注意：添加化合物之前不必洗滌細胞。但是，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長培養(yǎng)基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或抽吸后選擇的緩沖液?；蛘?，細胞可以在無血清培養(yǎng)基中生長。

2. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。

3. 在避光的條件下，于室溫或37°C下孵育平板1小時。（孵育時間可能是15分鐘到過夜。孵育時間少于4小時，我們獲得了結(jié)果）。 注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。 注意： 加載后請勿洗滌細胞。 注意： 對于非貼壁細胞，建議在孵育后以800 rpm的速度離心細胞板2分鐘，然后制動。

4. 使用熒光板讀數(shù)器（底部讀取模式）在Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）下監(jiān)控熒光強度。