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細(xì)胞內(nèi)一氧化氮（NO）活性檢測試劑盒 抗體適合于酶標(biāo)儀橙色檢測是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測細(xì)胞內(nèi)一氧化氮活性的試劑盒，一氧化氮（NO）是涉及許多生理和病理過程的重要生物調(diào)節(jié)劑。改變的NO產(chǎn)生涉及各種免疫，心血管，神經(jīng)變性和炎性疾病。作為自由基，NO被快速氧化，并且體內(nèi)存在相對低濃度的NO。檢測和了解NO在生物系統(tǒng)中的作用一直具有挑戰(zhàn)性。 Cell Meter 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮檢測試劑盒提供了一種監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探針在我們的試劑盒中開發(fā)和使用，作為DAF-2的優(yōu)異替代品，用于檢測和成像細(xì)胞中的游離NO。與常用的DAF-2探針相比，Nitrixyte 探針具有更好的光穩(wěn)定性和增強(qiáng)的細(xì)胞滲透性。該特殊試劑盒使用Nitrixyte Orange，可與NO反應(yīng)生成亮橙色熒光產(chǎn)品，其光譜特性與Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加載到活細(xì)胞中，使用Cy3®或TRITC過濾器可以方便地監(jiān)測其熒光信號。該試劑盒針對熒光成像和酶標(biāo)儀應(yīng)用進(jìn)行了優(yōu)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的細(xì)胞內(nèi)一氧化氮（NO）活性檢測試劑盒 抗體。

適用儀器

流式細(xì)胞儀
Ex:	640 nm
Em：	660/20 nm
通道:	APC 通道

實(shí)驗(yàn)方案

樣本實(shí)驗(yàn)方案

概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞（0.5-1×106細(xì)胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.將細(xì)胞與測試化合物和Nitrixyte NIR在37oC下孵育所需的時間
4.使用APC通道通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

溶液配制

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 NONOate陽性對照儲備液（50 mM）：
將200 uL ddH2O加入小瓶NONOate陽性對照（組分B）中，制成50 mM NONOacte陽性對照處理原液。

2.工作溶液

用測定緩沖液（組分C）稀釋50 mM NONOate陽性對照原液，制成1-2 mM NONOate陽性對照工作溶液。

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樣品操作及實(shí)驗(yàn)分析

1.對于每個樣品，在0.5 mL溫?zé)崤囵B(yǎng)基或您選擇的緩沖液中以5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨(dú)評估每個細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)NO的佳細(xì)胞密度。

2.將1 µL 500X Nitrixyte NIR（組分A）加入0.5 mL細(xì)胞懸液中。注意：對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。

3.將細(xì)胞與測試化合物和Nitrixyte NIR在37oC下孵育所需的時間，以生成內(nèi)源性或外源性NO。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細(xì)胞類型和測試化合物。優(yōu)化每個實(shí)驗(yàn)的孵育時間。注意：我們已在37°C的細(xì)胞培養(yǎng)基中將Raw 264.7細(xì)胞與Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精an酸（L-Arg）孵育16小時。

4.旋轉(zhuǎn)已用Nitrixyte NIR預(yù)孵育30分鐘的細(xì)胞。用1 mM DEA NONOate陽性對照工作溶液重懸細(xì)胞，并在37oC下再孵育30分鐘。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見圖1。

5.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的熒光強(qiáng)度。