Amplite 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)的試劑盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和熒光素酶是常見(jiàn)的報(bào)告基因。好的多功能常見(jiàn)報(bào)告基因是來(lái)自于北美的螢火蟲(chóng)Photinus pyralis的熒光素酶。此酶蛋白的活性不需要進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯后修飾獲得。它在活細(xì)胞中高濃度積累不會(huì)造成細(xì)胞毒性，可以在原核和真核細(xì)胞中使用。在ATP、鎂離子和氧存在的條件下，螢火蟲(chóng)熒光素酶催化熒光素氧化形成生物熒光。檢測(cè)試劑盒利用與熒光強(qiáng)度相關(guān)的公式來(lái)定量檢測(cè)活細(xì)胞和細(xì)胞抽提物中的熒光素酶。在熒光素酶的催化下，我們的試劑/試劑盒會(huì)產(chǎn)生具有強(qiáng)烈熒光的熒光產(chǎn)物。本試劑盒提供所有的必需組分，并且經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，我們還提供可以用于HTS（高通量篩選）實(shí)驗(yàn)方案。本試劑盒具有非常好的靈敏度，可以用于對(duì)靈敏度有要求的分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒。 

適用儀器

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞（樣品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的螢光素酶工作溶液
3.在室溫下孵育10-20分鐘
4.檢測(cè)560 nm處的熒光強(qiáng)度

溶液制備 

1.工作溶液配制

將全部反應(yīng)緩沖液（組分B）轉(zhuǎn)移到熒光素酶（組分A）的瓶中，并充分混合以制成熒光素酶工作溶液。 

樣品操作及分析

1.進(jìn)行熒光素酶檢測(cè)：

1.1通過(guò)在所需化合物緩沖液中加入10 µL 10X測(cè)試化合物（96孔板）或5 µL 5X測(cè)試化合物（384孔板）來(lái)用檢測(cè)化合物處理細(xì)胞（或樣品）。 對(duì)于空白孔（沒(méi)有細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。

1.2將細(xì)胞板在5％CO2培養(yǎng)箱中于37°C孵育一段時(shí)間（通常為4小時(shí)至過(guò)夜）。

1.3每孔熒光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室溫下孵育平板10-20分鐘。

1.5用酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

2.建立標(biāo)準(zhǔn)的螢光素酶校準(zhǔn)曲線：注意：如果需要計(jì)算樣品中螢光素酶的量，則應(yīng)與上述測(cè)定法一起生成螢光素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1使用不含螢光素酶的樣品（作為對(duì)照）來(lái)檢測(cè)背景發(fā)光，在含0.1％BSA的PBS緩沖液中進(jìn)行一系列螢光素酶稀釋液。 注意：通常螢光素酶的濃度從1 pg / mL到1 ng / mL是合適的。

2.2將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀釋的熒光素酶溶液添加到一個(gè)空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的熒光素酶工作溶液。

2.4在避光的條件下，將反應(yīng)混合物在室溫下孵育10-20分鐘。

2.5用標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀記錄熒光強(qiáng)度。

2.6生成熒光素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。