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Cell Meter 熒光法脂肪酸攝取檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的脂肪酸檢測(cè)試劑盒，脂肪酸攝取是治療許多人類疾?。ɡ绶逝职Y，2型糖尿病和肝臟脂肪變性）的重要治療靶標(biāo)。 Screen Quest 熒光脂肪酸攝取分析試劑盒為測(cè)量含有脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的細(xì)胞中的脂肪酸提供了一種簡(jiǎn)單而靈敏的方法。該試劑盒使用專有的十二烷酸熒光脂肪酸底物。該脂肪酸攝取測(cè)定試劑盒可在具有底讀模式或FITC通道的任何熒光酶標(biāo)儀上進(jìn)行。該測(cè)定可以在96孔或384孔微量滴定板中以簡(jiǎn)單的混合和讀取程序進(jìn)行，并且易于適應(yīng)高通量篩選應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter 熒光法脂肪酸攝取檢測(cè)試劑盒。

適用儀器

熒光酶標(biāo)儀
Ex:	485nm
Em：	515nm
cutoff:	495nm
推薦孔板:	黑色透明孔板
讀取模式:	底部讀取

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞4-6小時(shí)
2.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基中1小時(shí)，并根據(jù)需要處理細(xì)胞
3.加入100μL/孔的脂肪酸染料加載溶液
4.監(jiān)測(cè)熒光增加在Ex / Em = 485/515 nm處立即進(jìn)行動(dòng)力學(xué)或在孵育60分鐘后進(jìn)行終點(diǎn)讀數(shù)（底部讀取模式）

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
TF2-C12脂肪酸原液：
將20μLDMSO（組分C）加入到TF2-C12脂肪酸（組分A）的小瓶中并充分混合。注意：20μL熒光脂肪酸底物原液足以用于一個(gè)平板。如果將管密封并避光，可以將未使用的熒光脂肪酸底物儲(chǔ)備溶液等分并在<-20℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)兩個(gè)月。避免反復(fù)凍融循環(huán)

2.工作溶液配制

脂肪酸染料加載溶液：
將20μLTF2-C12脂肪酸儲(chǔ)備溶液加入10mL分析緩沖液（組分B）中并充分混合。注意：10毫升脂肪酸染料加載溶液足以用于一個(gè)平板; 為每個(gè)平板做準(zhǔn)備并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

操作步驟

1.根據(jù)需要用測(cè)試化合物處理細(xì)胞。

2.從培養(yǎng)箱中取出化合物處理的細(xì)胞板，加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）（包括空白孔）的脂肪酸染料加載溶液。

3.使用底部讀取模式，使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 485 / 515nm（在495nm處截止）測(cè)量熒光信號(hào)。注意：對(duì)于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)：立即以20秒間隔讀取熒光強(qiáng)度30-60分鐘。注意：對(duì)于終點(diǎn)讀數(shù)：讀取30-60分鐘孵育結(jié)束時(shí)的熒光強(qiáng)度。

數(shù)據(jù)分析

圖1. 3T3-L1脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對(duì)脂肪酸攝取的比較。將細(xì)胞以50,000個(gè)細(xì)胞/ 100mL /孔接種在96孔黑色壁/透明底部聚-D賴氨酸平板中5小時(shí)，然后將血清剝奪1小時(shí)。在沒有（對(duì)照）或用胰島素（150nM）處理細(xì)胞，并在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。在孵育時(shí)間結(jié)束時(shí)，將100μl脂肪酸混合物加入孔中，并再孵育60分鐘，使用底部讀取模式用FlexStation讀板儀測(cè)量熒光信號(hào)。 A - 成纖維細(xì)胞（對(duì)照）; B - 成纖維細(xì)胞（胰島素）; C - 脂肪細(xì)胞（對(duì)照）; D-脂肪細(xì)胞（胰島素）。