5-FAM 5-羧基熒光素疊氮化物是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光素，5-FAM疊氮化物是通過與炔基反應開發(fā)熒光生物共軛物的良好試劑。 5-FAM是羧基熒光素的純化單一異構(gòu)體。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的5-羧基熒光素疊氮化物。

操作方案

標記寡核苷酸

1.準備以下試劑：

200mMTHPTA [tris（3-羥丙基三唑基甲基）胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾的低聚水溶液（盡可能濃縮，例如>10 mg / mL）

100mM抗壞血酸鈉水溶液

10mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）

2.在反應前將CuSO4與THPTA以1：2的比例混合并充分渦旋幾分鐘。該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴改性的低聚物溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為2-5當量）。

4.加入5當量的THPTA / CuSO4工作溶液（來自步驟1）。

5.加入10-30當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.通過所需的方法（例如HPLC）沉淀或純化乙醇。

標記肽

1.準備以下試劑：

200mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾肽水溶液或DMF溶液（取決于您的肽溶解度，>10 mg / mL）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴修飾的肽溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。

4.加入5-10當量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.通過HPLC純化您想要的肽。

標記炔烴有機小分子

1.準備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴化合物水溶液或DMF溶液（取決于您的化合物溶解度，> 10mg / mL，）

100mM抗壞血酸鈉水溶液

10mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）。

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。當冷凍時，該溶液可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。

4.加入25當量的THPTA / CuSO4。

5.加入50當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌反應混合物30-60分鐘。

7.通過色譜或其他方法純化您想要的分子。

標記生物聚合物

1.準備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴改性的水中生物聚合物（盡可能濃縮，例如> 5毫克/毫升）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）。

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴改性的生物聚合物溶液中加入過量的染料疊氮化物（負載比：5-20染料疊氮化物/炔烴）。

4.加入5摩爾當量（參考染料疊氮化物）的THPTA / CuSO4。

5.加入10當量的抗壞血酸鈉（參見染料疊氮化物）。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.通過凝膠過濾或透析純化您想要的分子。

標記細胞，細胞裂解物或生物樣品

1.準備以下試劑：

100mM THPTA配體水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗壞血酸鈉水溶液

2.5mM炔烴或疊氮化物標記試劑水溶液或DMSO溶液

2.對于每個疊氮化物或炔烴修飾的細胞或細胞裂解物樣品，將以下試劑加入1.5 mL微量離心管中，然后短暫渦旋混合。

50μL細胞或細胞裂解液樣品

50μLPBS緩沖液

50μL5mM相應的染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烴）檢測試劑

3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暫渦旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暫渦旋振蕩。

5.加入10μL300mM抗壞血酸鈉溶液以引發(fā)點擊反應，短暫渦旋混合。

6.保護點擊反應不受光照，使其在室溫下孵育30分鐘。

7.點擊標記細胞或細胞裂解物并準備用于下游處理和分析。