重組*轉(zhuǎn)移酶GST標簽蛋白抗體，anti-rGST上海安研現(xiàn)貨直銷，免費快遞送貨上門。規(guī)格：0.1ml，0.2ml；濃度：1mg/ml；類型：一抗；產(chǎn)品價格：電詢；用途：僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。使用前仔細閱讀本說明書。貨期：現(xiàn)貨；保存：Store at -20 °（ Not yet tested in other applications.Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user）點擊查看更多產(chǎn)品信息

重組*轉(zhuǎn)移酶GST標簽蛋白抗體，anti-rGST細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題。國內(nèi)外研究表明，95%以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、*支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和菜氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。國外調(diào)查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。 
支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染，等等。 
體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力，因此培養(yǎng)基應(yīng)達到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染（如細菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體、補體）。對于天然培養(yǎng)基，污染主要來源于取材過程及生物材料本身，應(yīng)當(dāng)嚴格選材，嚴格操作。對于合成培養(yǎng)基，污染主要來源于配制過程，配制所用的水，器皿應(yīng)十分潔凈，配制后應(yīng)嚴格過濾除菌。 
由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回。支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞*共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞手到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等。 

抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應(yīng)根據(jù)需要選擇。 
在細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)破碎的細胞甚多，培養(yǎng)細胞需要頻繁改善營養(yǎng)環(huán)境才能支持*傳代培養(yǎng)時，應(yīng)該懷疑支原體污染。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化，培養(yǎng)液也不渾濁。 

Collect cells （confluent T-25） by trypsinization and spin. 
Lyse the pellet with 100 µl lysis buffer on ice for 10 min. 
For 500,000 cells, lyse with 20 µl. 
Spin at 14,000 rpm （16,000 g） in an Eppendorf microfuge for 10 min at 4°C. 
Transfer the supernatant to a new tube and discard the pellet. 
Determine the protein concentration （Bradford assay, A280, or BCA） 
（We use the Bradford assay from Bio-Rad.） 
Take x µl （= y µg protein） and mix with x µl of 2x sample buffer. 
Boil for 5 min. 
Cool at RT for 5 min. 
Flash spin to bring down condensation prior to loading gel.

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蛋白質(zhì)的制備是一項十分細致的工作。涉及物理學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的知識很廣。近年來雖有了不少改進，但其主要原理仍不外乎兩個方面：一是利用混合物中幾個組分分配率的差別，把它們分配于可用機械方法分離的兩個或幾個物相中，如鹽析、有機溶劑提取、層析和結(jié)晶等；二是將混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同區(qū)域而達到分離的目的，如電泳、超離心、超濾等。由于蛋白質(zhì)不能溶化，也不能蒸發(fā)，所能分配的物相只限于固相和液相，并在這兩相間互相交替進行分離純化。制備方法可按照分子大小、形狀、帶電性質(zhì)及溶解度等主要因素進行分類。按分子大小和形態(tài)分為差速離心、超濾、分子篩及透析等方法；按溶解度分為鹽析、溶劑抽提、分配層析、逆流分配及結(jié)晶等方法；按電荷差異分為電泳、電滲析、等電點沉淀、離子交換層析及吸附層析等；按生物功能專一性有親合層析法等。

Agarose plug: 
1% agarose dissolved in 1x Resolving gel buffer. 
（I make 50 ml, keep melting it as I need it, and re-adding water to maintain agarose conc.） 
Resolving gel: 24 ml of a 9% gel 
5.4 ml 40% acrylamide/bisacrylamide （29:1 mix） 
3 ml 8x Resolving gel buffer 
15.6 ml water 
12 µl TEMED 
60 µl 20% ammonium persulfate 
Stacking gel: 8 ml 
1 ml 40% acrylamide/bisacrylamide （29:1 mix） 
2 ml 4x Stacking gel buffer 
5 ml water 
8 µl TEMED 
21.6 µl 20% ammonium persulfate 

由于不同生物大分子結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)不同，分離方法也不一樣。即同一類生物大分子由于選用材料不同，使用方法差別也很大。因此很難有一個統(tǒng)一標準的方法對任何蛋白質(zhì)均可循用。因此實驗前應(yīng)進行充分調(diào)查研究，查閱有關(guān)文獻資料，對欲分離提純物質(zhì)的物理、化學(xué)及生物學(xué)性質(zhì)先有一定了解，然后再著手進行實驗工作。對于一個未知結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的試樣進行創(chuàng)造性的分離提純時，更需要經(jīng)過各種方法比較和摸索，才能找到一些工作規(guī)律和獲得預(yù)期結(jié)果。其次在分離提純工作前，常須建立相應(yīng)的分析鑒定方法，以正確指導(dǎo)整個分離純化工作的順利進行。高度提純某一生物大分子，一般要經(jīng)過多種方法、步驟及不斷變換各種外界條件才能達到目的。因此，整個實驗過程方法的優(yōu)劣，選擇條件效果的好壞，均須通過分析鑒定來判明。