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柱式土壤DNAout

時間:2013/6/26閱讀:761
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柱式土壤DNAout
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是整合天澤基因土壤DNAOUT(CAT:6070)和柱式腐殖酸清除劑(CAT:6080)兩個產(chǎn)品而得的柱式升級產(chǎn)品。它結合了兩者的優(yōu)點,專門用于從各種土壤樣品和河海沉積物中提取高質(zhì)量的DNA的試劑。跟土壤DNAOUT相比它具有下列特點:
. 去污染效果更好,得到的DNA可以直接作為PCR模板或酶切,不需要再進行去腐殖酸處理。
2. 操作過程更加簡單快速,整個操作只需要0多分鐘,擴容性好。
3. 產(chǎn)量高,每克土壤一般可以提取到5-50 ug DNA,片段長度在20-50 Kb,OD260/280一般都在.8以上。
4. 適合于各種土壤(包括河海沉積物)。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 25 mL
溶液B 25 mL
溶液C 40 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
通用洗脫液 0 mL
使用手冊 份

運輸及保存 常溫運輸及保存,保存期為一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 . 65℃預熱溶液A,待其沉淀溶化后充分混勻,取0.5 mL加入到.5 mL塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取0.-0.3 g的土壤,加入到含預熱溶液A的離心管中,震蕩器上劇烈震蕩5-0分鐘。如果是擴量操作,可以使用更多土壤和較大離心管。也可以將同一種土壤在較大離心管中震蕩處理,然后再分到.5 mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管,一定要讓管底的土壤震蕩起來。
3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5分鐘。
4. 2000-5000 g室溫離心3分鐘,將上清轉移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色,實際顏色取決于腐殖酸的含量,上清液的體積一般為300-400 µL)。
5. 在上清液中加入等體積的溶液B,上下顛倒30秒充分混勻,溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5分鐘。
7. 2000-5000 g室溫離心3分鐘,轉移上清到新的.5 mL離心管中,上清液顏色將比第4步得到的上清的顏色稍淡,體積在0.7 mL左右。
注意:下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略,直接進入第0步,但DNA的產(chǎn)量會低50%左右,OD260/280在.7-.8。如果直接進入第0步,則轉移的溶液體積不要超過0.6 mL,否則沒有空間加溶液C。
8. 加入0.2 mL的氯仿(自備),震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。
9. 2000-5000 g室溫離心3分鐘,小心轉移上清到新離心管中。說明:離心后兩相交界面將有白色膜狀物,其中有機相部分顏色較深,一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。將上清轉移到新的.5 mL離心管時,不要超過0.6 mL,否則沒有空間加溶液C。如果有多余的可以棄之不用。
0. 加入.5倍體積的溶液C,上下顛倒30秒混勻。
. 分兩次上柱(即先轉移一半的混合液到離心吸附柱中,2000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液,然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中,2000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液)。
2. 加0.7 mL通用洗柱液到離心吸附柱中,2000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
3. 如果有必要,可以再加0.3 mL通用洗柱液到離心吸附柱中,2000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。增加一步洗滌能使zui后得到的DNA的純度稍有提高,但產(chǎn)量稍微有所降低。
4. 2000-5000 g室溫再離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的通用洗柱液會污染DNA。
5. 將離心吸附柱轉移到一新的.5 mL塑料離心管中,加入50-00 uL 通用洗脫液。
6. 室溫放置離心吸附柱-2分鐘。
7. 2000-5000 g室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為DNA樣品,可以立即使用或存放于冰箱待用。
 

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