培養(yǎng)基生物材料的選擇和大分子的提取
制備生物大分子,首先要選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基生物材料。材料的來(lái)源無(wú)非是動(dòng)物、植物和微生物及其代謝產(chǎn)物。從工業(yè)角度選擇材料,應(yīng)選擇含量高、來(lái)源豐富、制備工藝簡(jiǎn)單、成本低的原料,但往往這幾方面的要求不能同時(shí)具備,含量豐富但來(lái)源困難,或含量來(lái)源較理想,但材料的分離純化方法繁瑣,流程很長(zhǎng),反倒不如含量低些但易于獲得純品的材料,由此可見(jiàn),必須根據(jù)具體情況,抓住主要矛盾決定取舍。從科研工作的角度選材,則只須考慮材料的選擇符合實(shí)驗(yàn)預(yù)定的目標(biāo)要求即可。除此之外,選材還應(yīng)注意植物的季節(jié)性、地理位置和生長(zhǎng)環(huán)境等。選動(dòng)物材料時(shí)要注意其年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況、遺傳素質(zhì)和生理狀態(tài)等。動(dòng)物在饑餓時(shí),脂類和糖類含量相對(duì)減少,有利于生物大分子的提取分離。選微生物材料時(shí)要注意菌種的代數(shù)和培養(yǎng)基成分等之間的差異,例如在微生物的對(duì)數(shù)期,酶和核酸的含量較高,可獲得較高的產(chǎn)量。
培養(yǎng)基生物材料選定后要盡可能保持新鮮,盡快加工處理,動(dòng)物組織要先除去結(jié)締組織、脂肪等非活性部分,絞碎后在適當(dāng)?shù)娜軇┲刑崛?,如果所要求的成分在?xì)胞內(nèi),則要先破碎細(xì)胞。植物要先去殼、除脂。微生物材料要及時(shí)將菌體與發(fā)酵液分開(kāi)。生物材料如暫不提取,應(yīng)冰凍保存。動(dòng)物材料則需深度冷凍保存。
"提取"是在分離純化之前將經(jīng)過(guò)預(yù)處理或破碎的細(xì)胞培養(yǎng)基置于溶劑中,使被分離的生物大分子充分地釋放到溶劑中,并盡可能保持原來(lái)的天然狀態(tài)不丟失生物活性的過(guò)程。這一過(guò)程是將目的產(chǎn)物與細(xì)胞中其他化合物和生物大分子分離,即由固相轉(zhuǎn)入液相,或從細(xì)胞內(nèi)的生理狀況轉(zhuǎn)入外界特定的溶液中。
影響提取的因素主要有:目的產(chǎn)物在提取的溶劑中溶解度的大?。挥晒滔鄶U(kuò)散到液相的難易;溶劑的pH值和提取時(shí)間等。一種物質(zhì)在某一溶劑中溶解度的大小與該物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)及使用的溶劑的理化性質(zhì)有關(guān)。一般地說(shuō),極性物質(zhì)易溶于極性溶劑,非極性物質(zhì)易溶于非極性溶劑;堿性物質(zhì)易溶于酸性溶劑,酸性物質(zhì)易溶于堿性溶劑;溫度升高,溶解度加大,遠(yuǎn)離等電點(diǎn)的pH值,溶解度增加。細(xì)胞培養(yǎng)基提取時(shí)所選擇的條件應(yīng)有利于目的產(chǎn)物溶解度的增加和保持其生物活性。