上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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- 型號(hào) T25
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更新時(shí)間:2021-12-28 17:07:42瀏覽次數(shù):262
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公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息:
英文簡(jiǎn)稱:PAXCS-008細(xì)胞
產(chǎn)品名稱:源胰腺癌細(xì)胞
規(guī)格:T25
形態(tài)特性:上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
特征特性:
培養(yǎng)條件:
傳代方法: 1:3傳代,CQ-4天傳1次
貨號(hào):CS-X63934
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞*在對(duì)數(shù)生,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過(guò)低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌*消化過(guò)度,吹打不可太用力,*不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格,我從10%-90%都用過(guò),問(wèn)題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(zhǎng),-80度過(guò)夜,最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Cystobacter minus
小孢囊桿菌拉丁屬名: Bacillus pulvifacieus Katznelson
塵埃芽孢桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
血痕韌革菌拉丁屬名: Micromonospora Purpurea
紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)*拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
被孢霉屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
嗜線蟲(chóng)致病桿菌拉丁屬名: Streptomyces carpaticus
鯉鏈霉菌拉丁屬名: Rhizopus japonicus
日本根霉拉丁屬名: Bacillus subtilis
枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Lactobacillus acidophilus
嗜乳桿菌拉丁屬名: Rhizopus oryzae
米根霉拉丁屬名: ovata
卵形巴貝斯蟲(chóng)(文縣株)注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
毛木耳用途: Utilizes benzoates (also substituted)
食苯芽胞桿菌用途: 害蟲(chóng)生物防治
PAXCS-008細(xì)胞*英文名稱: 2-Phenylacetamide早期發(fā)育調(diào)控蛋白2抗體包裝100g
*(速尿)英文名稱: Enoxacin磷酯酶Cβ3包裝25g
苯咪唑英文名稱: [Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I血小板源性生長(zhǎng)因子A抗體包裝100mg
芬那酸,滅酸英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (1-34) amide (bovine)特異性核苷酸果糖β抗體包裝500mg
喹酮英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)11號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框73抗體包裝25mg
馬西尼/馬澤尼英文名稱: [Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)磷酸乙轉(zhuǎn)移酶A抗體包裝100ml
尼辛葡英文名稱: [Phe2,Orn8]-Oxytocin前列環(huán)素受體抗體包裝1g
派利多,哌利多英文名稱: [Ser4,Ile8]-Oxytocin原鈣粘蛋白7抗體包裝5g
他英文名稱: [Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)過(guò)氧化物酶膜蛋白1抗體包裝1mg
福美斯坦英文名稱: [Trp4]-Kemptide橋粒斑菲素蛋白2抗體包裝100ml
*英文名稱: [Tyr8] Bradykinin胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25ml
福沙吡坦二葡(MK-0517)英文名稱: [Tyr9]- β-MSH (porcine)*/*蛋白激酶PCTK2抗體包裝100g
*英文名稱: α-ANF(1-28), human磷酸二酯酶7抗體包裝25g
富馬酸* (二)英文名稱: α-MSH磷酸二酯酶7B抗體包裝5g
富馬酸*(無(wú))英文名稱: β-Amyloid Peptide (1-42), human先天性眼外肌纖維化相關(guān)蛋白FEOM2抗體包裝100mg
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將*成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% *和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。