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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購信息：

英文簡(jiǎn)稱：MDCK-II細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱：犬腎細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1:3傳代，CQ-4天傳1次

貨號(hào)：CS-X64077

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
AMPA離子能受體3(GRIA3)檢測(cè)試劑盒英文名稱：GRIA3 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框122抗體包裝1g

AMPA離子能受體2(GRIA2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：GRIA2 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框123抗體包裝5g

ADP核糖轉(zhuǎn)移酶1(ART1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：ART1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框124抗體包裝25g

Ⅻ型膠原(COL12)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL12 ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框3抗體包裝5g

Ⅹ型膠原(COL10)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL10 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框127抗體包裝25g

ⅩⅤ型膠原(COL15)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL15 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框129抗體包裝5g

Ⅶ型膠原(COL7)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL7 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框130抗體包裝25g

Ⅵ型膠原α1(COL6α1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL6α1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框131抗體包裝5g

Ⅴ型膠原α2(COL5α2)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL5α2 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框135抗體包裝5g

Ⅳ型膠原α1(COL4α1)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL4α1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框141抗體包裝100ml

Ⅳ型膠原(COL4)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL4 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框144抗體包裝25ml

Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：PⅢNP ELISA KitCOPA蛋白抗體包裝1g

Ⅲ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅢ)檢測(cè)試劑盒英文名稱：CTXⅢ ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框185抗體包裝5g

Ⅲ型膠原(COL3)檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL3 ELISA Kit磷酸化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝1g

Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)檢測(cè)試劑盒英文名稱：PⅡCP ELISA Kit磷酸化α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝250mg
MDCK-II細(xì)胞苯磺酸氨地平（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Enrofloxacin CHIC2蛋白抗體包裝25g

苯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Enrofloxacin HCL磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體包裝5g

苯酸,安息香酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Enrofloxacin HCL磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體包裝100ml

苯酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Zolmitriptan磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體包裝25ml

苯酸硝唑（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thymosin alpha 1 Acetate磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體包裝50MG

苯酸硝唑（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tegafur磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體包裝25g

苯酸利扎曲普坦（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tegafur遺傳性脈絡(luò)膜缺乏癥相關(guān)蛋白抗體包裝5g

苯酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Acipimox遺傳性脈絡(luò)膜缺乏癥相關(guān)蛋白樣抗體包裝50MG

苯酸乙酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Acipimox腺癌標(biāo)志物CHMP2A抗體包裝1g

苯噻啶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Adapalene染色質(zhì)修飾蛋白CHMP6抗體包裝5g

苯妥英（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Adapalene染色質(zhì)修飾蛋白CHMP5抗體包裝100g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Adefovir間隙連接蛋白31.1抗體包裝25g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Adefovir緊密連接蛋白10抗體包裝100g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： alfacalcidol緊密連接蛋白23抗體包裝1g

苯扎銨（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： PS 48緊密連接蛋白22抗體包裝25g