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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱(chēng)：MPP 89細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱(chēng)：間皮瘤細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：

生長(zhǎng)特性：

特征特性：

培養(yǎng)條件：

傳代方法：

貨號(hào)：CS-X64082

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
埃博霉素B；帕土匹龍英文名稱(chēng)： Amikacin Sulfate CERD4蛋白抗體包裝250mg

埃博霉素C英文名稱(chēng)： Amikacin Sulfate CES1P1蛋白抗體包裝5MG

埃博霉素D英文名稱(chēng)： Amphotericin B羧酸酯酶2抗體包裝1g

埃羅替尼英文名稱(chēng)： Amphotericin B羧酸酯酶3抗體包裝5g

艾力替尼磺酸鹽(AST1306)英文名稱(chēng)： Angiotensin Acetate羧酸酯酶4A抗體包裝25g

（三）英文名稱(chēng)： Anastrozole羧酸酯酶6抗體包裝100g

英文名稱(chēng)： AnastrozoleCezanne蛋白抗體包裝25g

奧拉帕尼英文名稱(chēng)： Apramycin sulfate內(nèi)臟移位線管蛋白CFC1蛋白抗體包裝5g

英文名稱(chēng)： Apramycin sulfate補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白2抗體包裝10ml

巴卡丁 III英文名稱(chēng)： Arbidol HCl補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白4抗體包裝1g

白藜蘆英文名稱(chēng)： Arbidol HCl補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白5抗體包裝25g

英文名稱(chēng)： Argatroban7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28A抗體包裝5g

蓓薩羅丁;貝沙羅汀英文名稱(chēng)： ArgatrobanCpG結(jié)合蛋白抗體包裝1g

苯丁酸氮芥英文名稱(chēng)： Argipressin AcetateCGG結(jié)合蛋白1抗體包裝25g

苯?；宙邏A(PKC-412)英文名稱(chēng)： AtenololcGMP依賴(lài)性蛋白激酶2抗體包裝5g
MPP 89細(xì)胞膽維丁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Cetirizine 2HCl磷酸化表面趨化因子受體4抗體包裝25g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Cetrorelix Acetate磷酸化表面趨化因子受體2抗體包裝5g

地（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Chelerythrine中心體蛋白104抗體包裝100mg

地喹銨（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Chlorhexidine Acatate/乙磷酸轉(zhuǎn)移酶1抗體包裝1g

地拉羅司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Fluvastatin sodium salt6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框163抗體包裝500mg

地雷他定（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Fluvastatin sodium salt6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框165抗體包裝1g

磷酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clinafloxacin6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框168抗體包裝250mg

/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Levamisole HCl6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框173抗體包裝5g

海（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Levamisole HCl6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框182抗體包裝1g

海雜質(zhì)Ⅰ（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clomipramine HCL 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框186抗體包裝5g

海雜質(zhì)Ⅱ（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clomipramine HCL 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框191抗體包裝10g

海雜質(zhì)Ⅲ（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clopidogrel Bisulfate6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框195抗體包裝1g

化（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clopidogrel Bisulfate6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框199抗體包裝5g

帕(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Clopidogrel Bisulfate7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體包裝1g

普羅（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Nabumetone6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框201抗體包裝100g