樣品實驗方案

溶液配制

工作溶液配制

1.準備StrandBrite 工作溶液：

1.1  準備的水溶液工作溶液StrandBrite 綠色通過在TE濃縮DMSO溶液的200倍稀釋液（在DEPC的10mM的Tris-HCl，1mM的EDTA，pH 7.5中經(jīng)處理的水）。例如，添加50μL StrandBrite 綠色 至10mL TE緩沖液，以制備足夠的工作溶液在200至100個測定樣品 μ L終體積。通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo工作溶液免受光照。

注意1：我們建議在塑料容器中而不是玻璃中制備此溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。

注意2：為獲得佳結(jié)果，應在準備后的幾個小時內(nèi)使用此溶液。

標準液配制：

1.準備RNA標準液的系列稀釋液（0到1µg / mL ）：

1.1準備一個100 μ 克/ mL儲備在RNA的溶液DEPC處理過的水。

1.2添加10μL 100 μ 克/毫升RNA儲備溶液（來自步驟2.1） ，以490 μ 大號測定緩沖液（成分B）為具有2 微克/ mL的RNA溶液，然后執(zhí)行1：2系列稀釋來獲得1000， 500、250、125、62.5、31.3、15.6和0 ng / mL。

1.3如表1和表2所述，將RNA標準品和含RNA 的測試樣品添加到96孔黑色固體微孔板中。

表1黑色固體96孔微孔板中RNA標準品和測試樣品的布局

注：RS = RNA 標準；BL =空白控制；TS =測試樣品

表2每個孔的試劑組成

注：將從15.6到1000 ng / mL的RNA標準品的系列稀釋液一式兩份地添加到DS1到DS7的孔中。

運行RNA assay分析：

1.將100μLStrandBrite Green工作溶液（來自步驟2）添加到RNA標準品，空白對照和測試樣品（參見步驟3）的每個孔中，以使總RNA測定體積為200μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔添加25μL樣品和25μLStrandBrite Green工作溶液。

2.在避光的條件下，將反應在室溫下孵育5至10分鐘。

3.用分光熒光計在Ex / Em = 490/525 nm （在515 nm 處截止）監(jiān)測熒光的增加。

注意：為使光漂白效應小化，請對所有樣品保持恒定的熒光測量時間。

4.用空白孔（僅含測定緩沖液）中的熒光作為對照，并從具有RNA標準液或測試樣品的比色皿中減去。RNA樣品的濃度根據(jù)RNA標準曲線測定。