96孔板檢測示例

操作步驟

以下方案是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 打開前讓所有組件升溫至室溫。處理所有材料時，務(wù)必使用干凈的一次性手套 使用無核酸酶水和無菌一次性聚丙烯塑料制品進(jìn)行試劑制備。

注意：沒有數(shù)據(jù)可用于解決StrandBrite Green RNA染色的致突變性或毒性。 因為這種試劑與核酸結(jié)合，所以應(yīng)將其作為潛在的誘變劑進(jìn)行處理，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?應(yīng)謹(jǐn)慎處理DMSO儲備溶液，因為已知DMSO有助于有機(jī)分子進(jìn)入組織。

1.準(zhǔn)備1X測定緩沖液

通過用無菌，蒸餾，無核酸酶的水稀釋濃縮的緩沖液20X（組分B）來制備1X測定緩沖液。

2.準(zhǔn)備StrandBrite 綠色工作溶液

通過在1X測定緩沖液中將濃縮的DMSO溶液稀釋200倍來制備StrandBrite Green工作溶液。例如，將50μLStrandBrite Green（組分A）加入10 mL 1X測定緩沖液中（來自步驟1）。通過用鋁箔覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。

注1：我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備，因為染料可能會吸附到玻璃表面。

注2：為獲得佳結(jié)果，該溶液應(yīng)在制備后幾小時內(nèi)使用。

3.準(zhǔn)備RNA標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液（0至1μg/ mL）：

3.1將10μL100μg/ mL RNA原液（組分C）加入990μL分析緩沖液（組分B）中，得到1μg/ mL RNA溶液，然后進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到約1000,300， 100,30,10,3,1和0 ng / mL。

注意：未使用的核糖體RNA標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）應(yīng)在無核酸酶的塑料瓶中分成單次使用的等分試樣，并儲存在-20℃。

3.2如說明書中表1和2中所述，將RNA標(biāo)準(zhǔn)品和含有測試樣品的RNA添加到96孔固體黑色微孔板中。

4.運(yùn)行RNA測定：

4.1將100μLStrandBrite 綠色工作溶液（來自步驟2）添加到RNA標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中（參見步驟3）中，使總RNA測定體積為200μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLStrandBrite 綠色工作溶液。

4.2在室溫下孵育反應(yīng)2至5分鐘，避光。

4.3使用熒光分光光度計在Ex / Em = 490 / 545nm（515nm處的截止值）下觀察熒光增加。

注意：為盡量減少光漂白，請保持所有樣品的熒光測量時間不變。

4.4空白孔中的熒光（僅含測定緩沖液）用作對照，并從具有RNA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品的那些比色皿的值中減去。根據(jù)RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品的RNA濃度。